Post by account_disabled on Jul 26, 2023 4:37:45 GMT -5
用 gSTED 显微镜获取图像，并使用 StarSearch 的在线 JAVA 软件对斑点进行计数 [ 55 ]。smFISH 探针列于补充表 7中。 RNA 反义纯化和质谱 (RAP-MS) RAP-MS 的操作如前所述 [ 13 , 26 ]。进行了两次独立的生物学复制。在杂交步骤之前，将与泛素 C (UBC) 探针一起孵育或用 RNase A（10 ug/ml，37 °C，30 分钟）孵育的样品用作阴性对照，以尽量减少潜在的背景。5'-生物素化的20聚体反义寡
核苷酸列于补充表 7中。 序贯免疫荧光和 smFISH 检测 细胞在盖玻片上生长48小时，并在室温下用4% PFA固定10分钟，在室温下用0.2% Triton X-100/PBS透化5分钟。然后将盖玻片与抗 DHX9 一抗国家电子邮件列表和 Alexa Fluor 488 偶联二抗一起孵育，并用 4% PFA 重新固定。接下来，如前所述在相同的盖玻片上进行 smFISH。使用双光子激发 gSTED 显
微镜（徕卡）采集数码照片，并在徕卡高级荧光软件（徕卡）中可视化。 动物研究 动物实验经英国曼彻斯特研究所癌症研究动物伦理委员会根据 1986 年《动物科学程序法》以及 ARRIVE 指南和会指南批准。所有小鼠最初被随机分为不同组，并被维持在无病原体的环境中，可以自由获取食物/水。治疗、测量和解剖均由生物资